HPLC中的溶剂效应

以紫苏子的含量测定案例，完全按照2015版药典方法，无论是标准品还是样品，均出现了较为严重的色谱峰前延现象。进行微调后，色谱峰型得到了极大改善，我们微调了哪些条件呢？其实很简单，仅仅降低了进样量或用流动相稀释样品就可以做到了。

 

 

 

 

其实上述现象就是色谱分析中时有发生的溶剂效应问题，那么何为溶剂效应？溶剂效应发生的原因是什么？如何避免溶剂效应呢？

 

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何为溶剂效应

 

 

同一种样品，所用的溶剂不同，其化学位移亦有一定的差异，这是由于溶剂与溶质之间有不同作用的结果，称为溶剂效应。狭义上来讲，就是当样品溶剂的溶剂强度强于流动相强度，由此带来的峰前延，峰展宽，峰分叉现象，就是溶剂效应。

 

 

 

 

溶剂效应发生的原因

 

 

据研究，在样品进样后，样品与色谱柱填料接触的瞬间，样品溶剂起着两个作用：第一是溶解样品；第二是在进样瞬间起到流动相的作用。由于进样时样品分子是由样品溶剂夹带着到达色谱柱的，并非所有样品分子同时达到，有一个先后次序，因此后达到色谱柱的样品溶剂在局部范围内就变成了先到达样品分子的流动相，样品溶剂对色谱分离的影响主要就来源于上述第二个作用上，即在进样瞬间起到流动相的作用，这个作用时间虽然很短，但此时样品浓度大，样品溶剂在短暂时间内对样品在色谱柱中的浓度分布产生较大影响，造成色谱峰前延，展宽，甚至分叉。

 

 

 

色谱分析中样品进样瞬间的分配行为

 

 

 

 

那么如何消除溶剂效应呢

 

 

 

1.用流动相或梯度初始流动相溶解样品，如样品不能完全溶解，应尽量采用与流动相比例接近的溶剂溶解样品。

 

2.减小进样体积，本例中紫苏子样品进样量由20uL减少为10uL, 溶剂效应消失。

 

3.增强流动相缓冲能力

 

4.采用商品化的溶剂效应消除器。

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