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分析方法开发，如何确定稀释剂，确保方法的适用性。今天一起来聊聊液相稀释剂的选择，仅供需要的小伙伴参考学习。
稀释剂的选择
分析方法开发，如何确定稀释剂，确保方法的适用性。
1、稀释剂的干扰
选择稀释剂，首先应考虑采用流动相体系，应关注以下几点：
稀释剂不得干扰已知杂质及主峰的检测。
根据化合物的溶解特定，可适当加入助溶剂，但最好控制在5%以内，避免强溶剂效应。
允许对照品溶液与供试品溶液配制方式有差异，但对照品所添加的助溶剂一般应控制在2%以内，必免溶剂效应产生不良影响（如峰型、保留时间、峰响应等与供试品有差异，导致无法准确定量）。
2、关注各杂质及主成分的溶解度
通常有关物质方法中主成分的浓度较大（1mg/ml~10mg/ml），若主成分在稀释剂中的浓度接近其饱和溶解度，可能出现以下三种情况：
供试品提取不充分，导致杂质测定结果偏低，部分未知杂质存在无法检出风险。
供试品提取重现性差，导致杂质测定结果重现性差。
样品在检测过程中有析出，存在影响杂质准确定量的风险。
因此在进行方法摸索时，需测定相关主成分在稀释剂中的饱和溶解度，最好满足饱和溶解度大于3倍的供试品浓度。
3、关注各杂质及主成分的稳定性
基于杂质谱分析，配制混标，考察混标中各杂质及主成分的稳定性。
部分杂质峰面积明显降低，可根据该类型化合物的结构特点，调整稀释剂的组成或注明供试品溶液的保存条件（如避光、冷藏等）。
部分杂质峰面积明显升高，结合主成分的结构特点，调整稀释剂的组成或注明供试品溶液的保存条件（如避光、冷藏等）。
“临用新制”，应注明时间，确保测定数据的准确性。若稳定性小于方法运行时间，个人认为是不可接受的。
4、关注溶剂效应
溶剂效应原定义为溶剂对于反应速率、平衡甚至反应机理的影响。针对于分析方法，主要指的是对溶解平衡的影响，涉及稀释剂与流动相、流动相与固定相。
4.1、稀释剂选择不当引起的溶剂效应-现象及原理
样品溶液的溶剂强度强于流动相溶剂强度时可能会造成的峰展宽、峰分叉现象，其过程为当溶解样品的溶剂不同于流动相时，样品溶剂与流动相发生混合，样品溶剂被冲稀。如果进样溶剂之强度高于流动相，样品在瞬间会表现为在较强溶剂中，并以较快速度通过色谱柱。色谱行为就是∶色谱峰的保留时间缩短。`当进样溶剂与流动相混合时，一部分分子会先与流动相混合，致使这些分子通过色谱柱的速度发生变化，使峰形扭曲，发生变形。
案例
某项目采用乙腈：水（50：50，v/v），谱图如下：
采用乙腈：缓冲盐ph7.8(50：50，v/v),谱图如下：
4.2、稀释剂选择不当引起的溶剂效应-如何判定
通过HPLC仪器比对一下两个劈叉峰的紫外吸收波谱，第一就是通过HPLC仪器比对一下两个劈叉峰的紫外吸收波谱，看看他们是否能完全一样的μV特征吸收，第二将进样体积调节到0.1μl看看，峰是否好转，如果满足上面两个条件几乎就可以肯定是100%的溶剂效应。
4.3、稀释剂选择不当引起的溶剂效应-如何避免
降低稀释的强度（如增加水相比例、调整pH等）或更换稀释剂为流动相，2、在保证检测灵敏度的前提下，降低进样量。3、增加峰形前延抑制器，峰形前延抑制器的设计原理是，在色谱柱前端引入一个大小合适的空腔，使样品到达色谱前被存留于空腔内的流动相（色谱柱平衡时流动相会充满空腔）稀释，使“样品溶剂”经稀释后更接近流动相的组成，实现“样品溶剂与流动相的组成接近”，并取代“用流动相溶解样品”的解决方案。
4.4、基质效应（溶剂效应的一个变种）
基质效应是指检测系统检测样品中的分析物时，处于分析物周围的所有非分析物质对分析物测定的影响。产生基质效应的原因与以下四个因素有关：仪器的设计、试剂的组成成分、测试方法的原理、质控材料的组成及处理技术等，通过回收率可以评估分析方法是否受基质效应的影响，一般若回收率普遍偏低、偏高或波动较大，建议考虑基质效应的影响。
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