1. 方法范围的扩展
2025年版药典：增加了对部分新药和生物类似药的HPLC分析方法，以适应新药开发的需求。 eg1：新增了多个针对生物技术产品（如利妥昔单抗）的HPLC分析方法，尤其是单克隆抗体药物和重组蛋白类药物。这些新方法包括特殊的色谱条件和检测策略，用于测定这些大分子药物的纯度、杂质以及生物活性。 eg2：对于中药领域，特别是包含了多组分的分析方法，这些方法能同时分析多种活性成分，有助于控制中药复方制剂的质量。 2020年版药典：更多关注传统化学药物的HPLC应用。
2. 仪器要求的优化
2025年版药典：规定了更详细的色谱柱和检测器选择指南，以提高分析的灵敏度和分辨率。 2020年版药典：侧重于仪器操作的稳定性和重现性。
3. 操作规程的细化
2025年版药典：提供了更为详尽的操作步骤和条件调整建议，包括色谱参数的选择和样品处理的细节（包括样品的提取、净化、浓缩和溶解等步骤），旨在减少误差并提高结果的一致性。 2020年版药典：更通用的方法描述，较少涉及具体的操作细节。
4. 数据处理与统计
2025年版药典：增强了数据处理和统计分析的部分，强调使用先进的统计软件进行结果解释，且看重数据完整性，特别是对数据完整性和审计追踪的要求，并提出了对电子记录和电子签名的要求，符合国际药品监管标准。 2020年版药典：更多依赖基本的数据处理手段，如计算平均值和标准偏差。
USP与Ph. Eur. 已删除峰宽的计算公式，仅保留了半高峰宽的计算公式。而2025年公示稿则同时保留了两种计算方式，且与上述药典公示保持一致。
而理论塔板数和分离度均提供了峰宽和半高峰宽两种计算公式。但在有异议时，判定标准均为以半高峰宽的计算结果为准。
