克隆筛选（单细胞分离）单细胞打印系统

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作为制备靶向治疗药物的一种方法，克隆细胞系的发展已经越来越受到重视和投入，然而面对单细胞克隆日益增长的实验需求， 目前常用的实现方法都不尽如人意。 通过有限稀释和显微镜操作，或利用像流式细胞仪这类的自动化设备进行细胞的筛选和分离，数量少且非常耗费时间和精力，缺少克隆性的依据，细胞存活率低，不能有效处理小批量样本，且具有较高的交叉污染风险。这些设备的采购和运营成本较高，但却缺乏证实克隆来自单细胞的证明。

    德国cytena公司开发的单细胞打印机（CloneSelect SCP）则有效解决了这一问题。这款专利产品技术将细胞检测传感器和按需滴定印刷技术相结合。过程类似于传统的喷墨打印机。通过在细胞轻轻的沉积在孔板之前筛选出单个细胞和细胞形态，确保细胞的活力；使用无菌的，一次性的打印墨盒避免了交叉污染；在沉积的过程中，提供单细胞的图像，为用户提供了他们的细胞系是来自于单克隆的证据，符合FDA对单抗的生产需证实来自于单个细胞的要求，大大提升药品的开发进程。

      Cytena开发的单细胞打印机是台式的自动化的实验室设备，由于软件采用直观，友好的界面设计，所以无需特别的经验，实验室的任何成员都可以进行操作 ，设备的操作设置简单快速，分离一块含单细胞的96孔板只需几分钟时间。

工作原理：

    SCP技术基于顶端的透明微型分配芯片，用于从细胞悬浮中按需生成微滴。分配器芯片是一个包含微流体结构的硅玻璃化合物，被称为剂量室的背面有一个硅膜（图b），它被一个压电板制动器所挤压偏转，这种挤压偏转导致腔体内的液体位移，液滴从喷嘴喷出来。根据流体的物理性质和压电控制参数，可以使用直径为40μm的喷嘴，将液滴体积控制在100 pL至250 pL的范围内。

    芯片连接到储存器，可以装载体积为5至100μL的细胞悬浮液。通过简单的手动上样法将细胞悬浮液装载到容器中来，芯片通过毛细管力自我填充，因此可以在样品加载后直接打印。 

技术亮点：

单细胞的证据可追溯性

在cartridge分离细胞前后的过程中，会连续拍取多张细胞图片，证实克隆来自于单个细胞。这些图片会根据孔板的位置进行命名，并存储在硬盘中，以便追踪。

单细胞打印效率高，且适用于多个细胞系

CloneSelect SCP打印效率普遍高于96%,有的细胞甚至达到100%。分离快速，一个96孔板只需2-3min，且每个孔都有多张图片证实为单细胞，该技术已经应用于在多种细胞的单细胞分离如CHO, HEK,Hela，L929，U2OS等。

细胞无损伤，单细胞存活率高

细胞无需标记染色，没有激光损伤，没有电压的影响，直接采用 catridge进行分离，所以细胞没有任何损伤，分离后的细胞存活率高，克隆恢复率高。

应用领域

•  单克隆筛选 

•  单细胞基因组学

•  单细胞PCR

•  稀有细胞的分离

应用案例

    克隆细胞系开发在单抗领域是一个至关重要的环节。现有的细胞系开发流程存在很多弊端如缺乏单克隆证据，单细胞分离效率低下，单细胞存活率低等。
    SCP技术不仅能快速有效的分离单细胞，还能提供单克隆来源的证据，且保证细胞高的存活率以及零风险的交叉污染。单细胞打印机SCP支持96孔和384孔板,已经成功应用于一系列典型的细胞系如CHO, U2OS，HEK293, L929，Hela细胞等。

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