生物大分子纯化指导原则
a.在纯化开始之前，先建立快速有效的评价方法：目的蛋白浓度，活性测定方法，收率界定及主要杂质的测定。
b.明确纯化目的，确定最终目的蛋白的纯度要求，活性要求，收率要求，批次处理量等。
c.在预实验和介质筛选过程中明确目的蛋白的理化性质，并挖掘目的蛋白和杂质性质的最大差异点。
在纯度和收率方面做好取舍，合理的设计纯化步骤和各种方法的衔接。
d.了解蛋白质制备过程常用的添加剂及添加剂对蛋白活性的影响，然后合理的添加。
生物大分子纯化策略
a.粗步纯化：快速除去大量的杂质及对目的蛋白稳定性有影响的物质，捕获浓缩目的蛋白，减少样品体积。此阶段选择通量大，载量大的纯化方式，如盐析及各种高流速高载量的层析介质等。
b.中度纯化：去除大部分杂质，进一步浓缩和纯化样品。此阶段选择载量高且分辨率高的方法纯化，如各种高流速高分辨率层析介质等。
c.精细纯化：去除残留的少量杂质，实现预期纯化目的。此阶段样品价值增高，选择回收率高和分辨率高的纯化方法，如各种高回收率，高分辨率的层析介质。
方法选择
通常在做纯化前对自己的目标物质特性了解越多对纯化将会越有利，如果不太了解，也可以通过SDS-PAGE电泳知道目标物质和杂质的情况，找到一种简单的鉴定方法，此外在纯化前必须先建立可靠的活性测定的方法。如果是未知的蛋白，那么通常可以有几种简单的摸索：
1. 凝胶过滤层析。这个方法很常用，但是效率不高，对低浓度的样品没有富集作用，上样量小。主要用在目标物质和杂质分子量相差较大且样品组分比较简单的精纯阶段。
2. 离子交换层析。此法很常用，但是样品必须没有高浓度的盐。可快速的用重力柱或者离心管分别对阴阳离子填料进行快速筛选，找到合适吸附填料。
3. 疏水层析。此法较好，它分离效率高，上样量大，特别适合分离盐析沉淀的样品。
4. 亲和色谱。是最有效的手段，关键了解目标物质的特性以便选择合适的亲和层析填料。
来源：生物制药合伙人
