基因扩增仪对于试样检测结果的分析及数据处理起到关键作用,各类研究和实验往往借助于PCR仪的检测和实验结果进行总结、分析,进而指导今后的工作或得到具有总结性的成果用于实际应用。采用PCR 仪进行实验,结果的影响因素主要包括以下几个方面:
(1)Template DNA模板,指靶 DNA 或被扩增 DNA(试样);
(2)Reagents 试剂,指荧光定量检测试剂;
(3)oligonucleotides核酸,主要指酶或活性酶;
(4)plastics塑料耗材,指试管耗材等,96 孔、单孔和8 连管等;
(5)Thermo-cycler 热循环,是指扩增仪控制过程,决定了仪器的热过程和准确性。
上述几种因素中,前四种因素在实际工作中很容易被关注到,而且得到很好的控制。如塑料耗材,可及时更换予以补充完善;核酸可通过生物指标分析得到需要的结果。而热循环因素的影响对于基因扩增仪至关重要,PCR仪基本原理是经过多次热循环对需要检测的样品或标本进行性能实验,包含的热过程主要有高温变性、低温复性、适温延伸等。因此热循环过程中温度参数的控制和准确对于实验结果有着极大的影响。
PCR仪要求实验运行工作区域部位达到设定温度,并按照相应设定程序完成热循环过程。实际上任何控制方法的仪器在工作区域都会存在温场均匀和温度波动的问题,不同位置温度是不同的,而准确的温度控制对整个PCR实验至关重要,PCR仪温度误差对实验的影响也是不容忽视的基因扩增仪校准应对工作区域的温度进行过程检测,通常使用的测温传感器如铂电阻、热电偶、热敏电阻等不适合于PCR仪的温度测量,由于仪器内的实验孔非常小,如想得到准确和有意义的结果,应采用专用的测试仪器或设备进行校准,并给出数据结果,应包含温度准确性、孔间温差、升降温速率、温度过冲、持续时间等。科学合理的检测设备是进行计量校准的关键,选择合理的设备进行PCR 仪的校准工作,以满足量传溯源需求。