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       实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团, 利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程, 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR技术的发展过程中, 两个重要的发现推动了荧光定量技术的大力发展: 在20世纪90年代早期、Taq DNA多聚酶的5'核酸外切酶活性能降解特异性荧光记探针的发现. 使得间接地检测PCR产物成为可能; 此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中实时地监测反应全过程得以实现。这两个发现的结合以及相应的仪特和试剂的商品化发展推动实时荧光定员PCR方法在研究工作中的运用.

实时荧光定量PCR 仪的工作原理
实时荧光定量PCR仪主要由样品载台、基因扩增热循环组件、微贷荧光检割光学系统、微电路控制系统、计算机及应用软件组成。样品载台的容量常见的是36孔、48孔、96孔、384孔。
基因扩增热循环组件工作原理与传统基因扩增仪大致相同,不同厂家不同型号的产品分别采用空气加热、压缩机制冷、半导体加热制冷等工作方式。微量荧光检测系统由荧光激发光学部件、微拯荧光检测部件、光路、控制系统组成。常用的荧光激发方式有两种: 卤鸽灯和LED;荧光检测元件常用两种方式: 光电倍培管和冷光CCD 摄像机. 光单色元件有滤光片和光栅。探测光路设计, 有的厂家采用步进电机加导轨的装置带动探测器的检测位置来测量每个样本的荧光。
配套的计算机和软件提供热循环编程、数据分析、热循环温度和荧光值实时监测图形显示、数据库管理等功能。