实时荧光定量PCR 由千应用了光谱技术, 与计算机技术相结合有较多的优点, 敏感性大大提高。 与普通PCR 模式相比, 实时荧光PCR 具备以下几个方面的特点和优势。
1)光谱技术与计算机技术的联合应用提高了灵敏度, 有效的减少了劳动量。Taq ManPCR 使用特定波长的激发光来激发荧光的产生, 利用灵敏光探测器检测荧光信号的大小, 通过计算机的分析软件进行分析, 灵敏度很高, 可以检测到单拷贝的基因, 这是传统PCR 难以做到的。
2) 由于扩培产物的检测在PCR 扩增过程中同时进行,并且数据的采集分析全部由仪器自动完成, 因此整个检测所需的时间比普通PCR 要节省许多。
3) 能有效避免污染。 传统的PCR 在扩增结束后需要电泳仪或紫外光下观测结果,除了有污染外, 还对人体产生一定的伤害; 而荧光实时定鱼PCR 在全封闭状态下实现扩增及产物分析, 有效地减少了污染对人体的伤害. 在大批量的标本检测中能有效地减少劳动量。
4) 能精确定量。由于PCR 的平台效应, 传统的PCR 不能进行精确的定量, 而荧光定量PCR, 由千利用扩增进入指数增长期的CT 值来定肚测拭起始模板的盘, 从而实现了极为精确的核酸定抵检测, 其精度可达每毫升100 拷贝.
5) 实时PCR 检测功能强大, 具备定性、定织、突变、多项目等检测功能. 而普通PCR 要完成上述项目需采用不同的技术平台。实时荧光PCR 进行定呈检测时, 其定量线性范围比普通PCR 要宽得多, 可达每毫升100~1010 拷贝
实时荧光定量PCR 仪发展前景
随着反应试剂、仪器和操作系统的不断发展和完善, 以实时荧光PCR 技术为核心的检测试剂盒纷纷问世, 逐步趋向千呈现灵敏特异、快速稍确和操作自动化的特点。当然, 由于成本较高, 操作难度较大, 目前在临床疾病的诊断和治疗上还未得到普及. 因此, 如何进一步提庙检测方法灵敏度、简化操作程序、缩短检测时间、消除非特异干扰、以及采用统一的、标准化的方法已成为实时荧光PCR 检测试剂盒未来研究的主要方向。许多研究者趋向于将更多的精力投人实时荧光定量PCR 方法的研究开发, 使之进一步录终自动化, 来提尚临床检验结果的准确性。在不久的将来, 实时荧光定量PCR 技术将以其显著的优势在分子生物学、实验医学, 特别是在临床医学领域达到越来越广泛的应用。