蛋白质印迹的过程
蛋白质印迹一般分为两个步骤:转移和检测。转移就是将蛋白质从凝胶转移到印迹膜上;检测又分为三步:先用封阻试剂封阻固定膜上未吸附蛋白质的区域;再用探针检出固定膜上感兴趣的蛋白质;最后用探针上的标记物显示感兴趣的蛋白质分子。
蛋白质印迹的主要类型
根据转移方法的不同,蛋白质印迹主要分为扩散印迹、毛细管印迹和电泳印迹。
扩散印迹时,凝胶放在两张固定膜之间,浸在缓冲液中自由扩散2~3天后,就得到两张互为镜像对称的转移膜,每张膜得到一半蛋白质)。这种方法适合于大孔凝胶,虽然简便但费时,而且分辨率降低。
毛细管印迹来源于DNA印迹法,在凝胶上放一张固定膜及一叠干滤纸,其上压以1~2kg重物,借助毛细管作用,当缓冲液流从储液腔流经凝胶和固定膜到滤纸上时,凝胶中的蛋白带随缓冲液流而转移到固定膜上。毛细管印迹适合于低分子量蛋白质和大孔凝胶。
毛细管印迹来源于DNA印迹法,在凝胶上放一张固定膜及一叠干滤纸,其上压以1~2kg重物,借助毛细管作用,当缓冲液流从储液腔流经凝胶和固定膜到滤纸上时,凝胶中的蛋白带随缓冲液流而转移到固定膜上。毛细管印迹适合于低分子量蛋白质和大孔凝胶。
电泳印迹是用电场将凝胶中的蛋白带转移到印迹膜上,它需要特定的装置,转移效率高,转移条件易控制,且能保持原有的分辨率。这是目前
最广泛使用的印迹方法。
应用
蛋白质印迹主要用于对极微量蛋白质进行分析、纯化、鉴定、复性等,如氨基酸的组成分析、序列分析、特异性结合分析等。